大鼠黏著斑激酶（FAK）ELISA試劑盒原理

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中大鼠黏著斑激酶（FAK）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠黏著斑激酶（FAK）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠黏著斑激酶（FAK）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

操作問題：

試劑準備不當可能影響酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA結果

在實驗室，對試劑準備一般不太注意，通常的做法是，在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。

    因此，在ELISA測定中試劑的準備zui為關鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內(nèi)的溫度較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質(zhì)量。

此外，當試劑盒以OPD為底物時，則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。

大鼠黏著斑激酶（FAK）ELISA試劑盒原理樣品要求

　·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。

　·檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿。

　·樣本收集后應立即-20℃保存，若長期保存應-70℃。

　·樣本量的要求：若一個指標做復孔檢測應不少于250ul，做單孔檢測應不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

  ·客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與溝通確認。

的回收率

    elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關系，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定,樣品水中含有無機氯20mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品,測定時忽略體積變化,如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L,則認為回收率為98%。

對于定量檢測來說，主要還是一個準確度的驗證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好，所以就貼上去了。相對回收率可能會高于100%的，如果只是說“損失程度”，其實是不準確的。應該說，回收率越接近100%，說明這個試劑盒的準確度越高。

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