新的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目已經(jīng)開始執(zhí)行策劃了，可能會(huì)有些實(shí)驗(yàn)新手面對(duì)ELISA的時(shí)候有些不知所措，在這之前掌握一些相關(guān)資料是肯定需要的，我公司在前面的文章里面也介紹過不少，今天上海恒遠(yuǎn)技術(shù)為您整理出了的試劑盒資料研究結(jié)果，一起來看下吧：
 1. 在成批手工檢測(cè)中，還應(yīng)注意操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時(shí)間不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不注意可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果或定量不準(zhǔn)。
 2. 加樣一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標(biāo)本時(shí)必須每份標(biāo)本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時(shí)則不需更換吸嘴。
 3. 洗滌是ELISA操作過程中決定實(shí)驗(yàn)成敗的一個(gè)關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，終止抗原抗體反應(yīng)，除去標(biāo)本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。上海恒遠(yuǎn)建議可用洗板機(jī)洗板或手工洗板，前者洗滌質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗滌效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大。
 4. 準(zhǔn)確判定結(jié)果須使用ELISA測(cè)讀儀（酶標(biāo)儀），比色法判讀可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)，根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長(zhǎng)的濾光片，以空白孔校零測(cè)定反應(yīng)孔的吸光度值（A值）。酶標(biāo)儀具有良好的重復(fù)性。
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   本次的試劑盒資料中還包括了問題解決這一方面，我們首先來看下“邊緣效應(yīng)”這一問題。其實(shí)也就是外周孔顯色較 中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時(shí)，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”了，并且可提高測(cè)定的重復(fù)性哦！ 
◇ 在ELISA實(shí)驗(yàn)中，血清為什么要稀釋？ 
   1. 競(jìng)爭(zhēng)抑制比較明顯，應(yīng)稀釋競(jìng)爭(zhēng)物；
   2. 血清中含有的性腺激素比較低，應(yīng)該濃縮才對(duì)。
    血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，當(dāng)然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關(guān)系也不大。不管你是用直接競(jìng)爭(zhēng)還是間接競(jìng)爭(zhēng)，血清的稀釋倍數(shù)肯定要事先確定，但也不用一點(diǎn)點(diǎn)，你做一個(gè)預(yù)試驗(yàn)即可，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數(shù)，即你的競(jìng)爭(zhēng)ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來的曲線比較敏感。
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     ELISA試劑盒預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定血清、血漿、組織勻漿或其它相關(guān)生物液體中目標(biāo)蛋白含量。ELISA法由于本身所具備的*性，是一項(xiàng)很有發(fā)展前途的血清學(xué)診斷方法，應(yīng)用領(lǐng)域也越來越廣泛。可我們認(rèn)為ELISA不是萬應(yīng)良方。因?yàn)镋LISA法還是有局限性，ELISA中變異因素多，對(duì)于要診斷某一疾病時(shí)，必須進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)室預(yù)試，摸索，或?qū)嶒?yàn)研究，常用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定血清的溶度。
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