建立促乳素單克隆抗體制備中篩選陽性分泌細(xì)胞的間接ELISA檢測方法

【方法】用促乳素純品與Freund佐劑免疫6~8周齡雌性BALB/c 小鼠,初次免疫采用抗原與*Freund佐劑,每2周免疫1次,從第2次開始采用抗原與不*Freund佐劑,免疫4次后尾靜脈采血,收集血清制備陽 性對(duì)照抗體,以未免疫的BALB/c小鼠血清為陰性對(duì)照,篩選間接ELISA法檢測促乳素抗體的*反應(yīng)條件,并對(duì)單克隆抗體制備中的陽性細(xì)胞進(jìn)行篩選。

【結(jié)果】間接ELISA法的*反應(yīng)條件:血清稀釋倍數(shù)為1∶200,抗原包被質(zhì)量濃度為100 ng/mL,封閉液為1%牛血清白蛋白,酶標(biāo)抗體的工作濃度為1∶10 000,酶標(biāo)抗體作用時(shí)間為37℃90 min,底物作用時(shí)間37℃30min。用該方法檢測融合的雜交瘤細(xì)胞,zui終獲得OD450為0.875和0.460的陽性細(xì)胞株。

【結(jié)論】建立了檢測促乳素抗體的間接ELISA檢測方法,該方法方便易行。